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人参皂甙的检验方法


A1 鉴别试验
取人参皂甙残渣,用甲醇制成每1ml含25mg,为供试样品,另取人参标准药材,照供试样品溶液配置,制成对照溶液,照薄层层析法(《中华人民共和国药典》一部(95)版附录35页薄层层析法)试验,取试验溶液与对照溶液各10mg,点于同一硅胶薄层板上,以三氯甲烷:甲醇:醋酸乙酯:水(15:22:40:10)的冷藏下层液为展开剂,展开,晾干,喷以10%硫酸 — 乙醇液,110℃加热10min显色,样品溶液与对照品溶液应在相同位置显色相同的颜色斑点。

A2 含量测定
样品粉碎后,精密称取2克(准确0.01克)样品,加入乙醚40ml,水浴微温,回流1小时,过滤,弃去乙醚液,于残渣中精密加入70%乙醇50ml,称定重量(准确0.01克),室温放置1小时,置于水浴上回流1小时,放冷,称重(准确0.01克),补足70%乙醇量,过滤,精密量取滤液25ml于蒸发皿中,于水浴上蒸干后,残渣用25ml水溶解并移入分液漏斗中,用水饱和的正丁醇(20,20,10,10ml)提取4次,合并正丁醇提取液,用水洗涤4次,每次20ml,移入105干燥至恒重的玻璃皿,置于水浴上蒸干,在105干燥半小时,在置于P2O5干燥器中,减压干燥12小时,精密称定,计算,即得。


有关学者及相关资料所提供的检测方法主要是:
1、《天然药物化学》,姚新生主编,北京:人民卫生出版社,1994年,336页,总皂甙检测方法;
2、《中药化学实验技术与实验》,冀春如等编,郑州:河南科技出版社,1998年,366页,总皂甙检测方法。

比色法检测
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器:
Amberlite-XAD-2大孔树脂,美国Sigma化学公司;正丁醇、乙醇,分析纯;中性氧化铝,层析用,100~200目;人参二醇,购自中国药品生物制品检定所;香草醛溶液,称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100ml;高氯酸、冰乙酸,分析纯;人参二醇标准溶液,精确称取人参二醇标准品0.010g,用甲醇溶解并定容至10.0ml,即每ml含人参二醇1.0mg;比色计,UV-201型,日本岛津公司生产;层析管,10ml注射器。

1.2 实验步骤
1.2.1试样处理 
称取1.0g左右的试样,置于100ml容量瓶中,加少量水,超声30min,再用水定容至100ml,摇匀,放置15min,吸取上清液1.0ml进行柱层析。
1.2.2 柱层析 
用10ml注射器作层析管,内装1gAmberlite-XAD-2大孔树脂,上层加1cm高的中性氧化铝。先用35ml85%乙醇洗柱,再用35ml水洗柱,弃去洗脱液,精确加入1.0ml已处理好的试样溶液,先用35ml水洗柱,以洗去糖分等水溶性杂质,再用35ml85%乙醇洗脱人参皂甙,收集洗脱液于蒸发皿中,于水浴挥干。以此作比色用。
1.2.3 显色 
在上述已挥干的蒸发皿中加入0.2ml5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣都溶解,再加0.8ml高氯酸,混匀后移入5ml带塞刻度离心管中,50~60℃水浴10min,取出冰浴冷却后,准确加入冰乙酸5.0ml,摇匀后,以1cm比色管于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
1.2.4 校正曲线 
吸取人参二醇标准溶液(1mg/ml)0、20、40、60、80、100μL(相当于人参二醇0、20、40、60、80、100μg)分别放入10ml带塞离心管中,放在水浴上挥干(低于60℃),或热风吹干(勿使过热),精确加入0.2ml5%香草醛冰乙酸溶液与试样同样显色比色。以人参二醇量与吸光值画校正曲线,进行回归处理。计算试样中人参皂甙量。
计算 x=A/2.5×V×100W/1000×1000 
式中:
x-试样中人参总皂甙量,g/100g;
A-从标准曲线得到的被测液中人参二醇量,μg;
V-试样稀释体积,ml;
W-试样质量,g;
2.5-Rb组皂甙平均分子量与人参二醇分子量之比(为常数)。

结果 
检测灵敏度与线性关系本法最低检出限度为10mg/100g试样人参皂甙。在人参二醇20~100μg之间成线性关系,相关系数为0.999。回归方程为y=120.03x+3.61从回归方程看,线性关系好(r=0.999)。