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前花青素的测定方法


前花青素是用水从法国沿海松树皮中提取出来的,并经过干燥的提取物的主要成分。
鉴定:
1. 颜色反应:反应后颜色为深红色。
将50mg的样品溶于1ml浓盐酸和4ml乙醇的混合溶液中,然后加热,直到混合溶液的颜色变为深红色为止。
2. 薄层色谱法:
吸附剂:硅胶60F251
展开剂:乙酸乙酯:甲酸:水=18:1:1(体积比)
显色:将磷酸和乙醇按(1:1)的体积比混合,再加入1%的香草醛,喷雾薄层板,加热1分钟,只出现前花青素的红色斑点,继续加热15分钟后,各种单体全部显色。
样品:将样品配成25mg/mg的甲醇溶液,取5μl点于薄层板上。
薄层色谱图谱
Rf 0.62 儿茶素
0.55 前花青素二聚体
0.41 前花青素二聚体
0.34 前花青素三聚体
0.26 前花青素四聚体
0-0.2 前花青素寡聚体
前花青素含量(Porter 试验)
一、原理:
前花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的分子,它氧化水解后能够生成红色的花青素离子。前花青素本身没有颜色,但是经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。Porter试验能够定量测定前花青素在水解过程中生成的花青素离子。
二、方法:
试剂:甲醇 正丁醇 盐酸 NH4Fe(SO4)2·12H2O
仪器:分光光度计。
将10mg样品溶于10ml甲醇中。
取上述样品溶液1ml,用甲醇稀释至10ml为待测检液。
将正丁醇与38%的盐酸按照95:5的体积比混合后,取出6ml;将NH4Fe(SO4)2·12H2O用浓度为2mol/L的盐酸按照2%(W/V)的比例配制,取出0.2ml,连同前面的6ml一同加到1ml待测检液中,在加盖密封的玻璃容器中(离心管)用沸水浴加热40分钟。如果对加盖的试管进行加热有麻烦的话,可以在沸水浴加热回流。精确加热40分钟后,立即用冰水冷却试管。在加热完毕后15分钟,于546nm处测吸光度。
前花青素所战百分素=
0.01389-反应混合物中样品的浓度 mg/ml。
0.366-A1%1cm在546nm处前花青素的吸光度。