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保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法


1 范围
本标准规定了保健仪器中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法。
本标准适用于保健食品(糖浆、糖粉、奶粉)中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定。
本方法最低检出量:异麦芽糖2μg;潘糖5μg;异麦芽三糖10μg;GF25μg;GF35μg;GF45μg;棉籽糖20μg;水苏糖30μg。
2 方法提要
样品除去蛋白后,离心、脱色,用液相色谱分析,用NH2柱分离,示差检测器测定,外标法定量。
3 试剂
所用试剂除注明外均为分析纯
3.1 乙晴(色谱纯)。
3.2 无水乙醇。
3.3 水(石英亚沸蒸馏)
3.4 麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖(含量≥98%),购于sigma试剂公司。
3.5 低聚果糖(总含量≥96%,其中GF238%,GF351%,GF47%)由华北药厂提供。
3.6 麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液:分别称取麦芽糖10.0mg,异麦芽糖15.0mg,潘糖9.0mg,麦芽三糖15.0mg,异麦芽三糖12.0mg,用水溶解,并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成下列浓度:
标准溶液名称:

标准溶液名称: 麦芽糖、 异麦芽糖、 潘糖、 麦芽三糖、 异麦芽三糖(mg/Ml)
1 0.50 0.75 0.45 0.75 0.60
2 1.00 1.50 0.90 1.50 1.20
3 2.00 3.00 1.80 3.00 2.40
4 10.00 15.00 9.00 15.00 12.00

3.7 低聚果糖标准溶液:精密称取含GF238%、GF351%、GF47%的低聚果糖标准品0.500g,用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成下列浓度:
标准溶液名称: GF2 GF3 GF4(mg/mL)
1 1.50 2.00 0.30
2 3.00 4.00 0.60
3 4.50 6.00 0.90
4 6.00 8.00 1.20
5 7.50 10.00 1.40

3.8 棉籽糖、水苏糖标准溶液:精密称取棉籽糖0.0400g,水苏糖0.0600g,用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成下列浓度:
标准溶液名称: 棉籽糖 水苏糖 (mg/mL)
1 2.00 3.0  
2 4.0 6.0  
3 6.0 9.0  
4 8.0 12.0  
5 10.0 15.0  

由于样品中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖,所以在配制标准应用液时可加入适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖,主要是用于定性。
将各标准系列注入高效液相色谱仪进行测定,绘制标准工作曲线。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪(附带示差检测器)。
4.2 离心机:10000r/min。
4.3 分析天平:1/10000。
4.4 分析天平:1/1000。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 糖浆和糖粉,称取1.0000g糖浆或0.2000g糖粉,用水稀释或溶解,并定容置10.0mL,摇匀,溶液过0.45μm滤膜,滤液用于HPLC测定。
5.1.2 不含乳液体饮料:饮料直接离心,上清液过0.45μm滤膜,滤液用于HPLC测定。
5.1.3 含乳液体饮料:取10.0mL样品放入烧杯中,加无水乙醇30mL,搅拌混匀,5min,离心,取上清液20mL在沸水浴上挥发近干。残液用于溶解并定容至5-10mL,溶液过0.45μm滤膜,滤液用于HPLC测定。
5.1.4 奶粉:称取2.000g样品,放入200mL烧杯中,加水15.0mL溶解,再加45.0mL无水乙醇,搅匀,放置5min,离心,取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干,残液用水溶解并定容至一定体积,溶液过0.45μm滤膜,滤液用于HPLC测定。
5.2 高效液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱:不锈钢柱,内径4.6mm×300mm HYPERSIL-NH2 5μm(大连依利特科学有限公司)。
5.2.2 柱温45℃,检测室40℃。
5.2.3 流动相:乙晴+水=76+24
5.2.4 流量:1.5mL/min。
5.2.5 灵敏度:64
5.2.6 进样量:20μL
5.2.7 在上述色谱条件下注入标准溶液和样品溶液,以保留时间定性,外标法定量。
6 计算
按下列公式计算

式中:X: 样品中某低聚糖的含量,g/kg(g/L)。
A: 样品的峰面积或峰高。
Ci: 某低聚糖标准溶液的浓度,mg/mL。
Ai: 标准溶液的峰面积或峰高。
M: 样品质量,g(mL)。
V: 样品定容体积,mL。
结果的表述:结果保留小数点后两位数
注:功能性异麦芽低聚糖的含量=异麦芽糖+潘糖+异麦芽三糖。因四糖、五糖标准不易买到,在异麦芽三糖后面的峰则按异麦芽三糖计算。
7. 允许差
同一实验室,平行测定两次结果的相对偏差不得超过10%。
8. 准确度
准确度以回收率表示。
将某种低聚糖加入糖浆,饮料或奶粉中,做回收率实验,回收率应在90%~104%范围内。
9 其他
色谱柱的转换步骤:
(1)1mL/min异丙醇,20min;
(2)1mL/min水,20min;
(3)2mL/min0.1mol/L H3PO4(pH~1.5),30min;
(4)2mL/min水,100min;
(5)2mL/min流动相(大约80%乙晴+20%水),30min。
10 色谱参考图