您的位置:首页 > 技术文库 > 保健食品检验方法

核苷酸含量测定方法


1 试剂
1.1 甲醇 优级纯。
1.2 乙酸 分析纯。
1.3 磷酸二氢钾 分析纯。
1.4 磷酸氢二钾 分析纯。
1.5 氨基固相萃取柱。
1.6 核苷酸标准储备溶液 准确称量经100℃,4h干燥处理的标准品胞嘧啶核苷(GMP)100mg,脲嘧啶核苷(UMP)、腺嘌呤核苷(AMP)、鸟嘌呤核苷(GMP)、次黄嘌呤核苷(IMP)各40mg,加水定容至100mL。
1.7 核苷酸标准使用液 将核苷酸标准储备溶液用0.25M,PH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。
2. 仪器设备
2.1 高效液相色谱仪:附紫外检测器(UV)。
3. 分析步骤
3.1 样品处理
3.1.1 准确称取10g样品于100mL容量瓶中,加入约50℃热水80mL,彻底混匀。当样品液达到室温后用水定容至刻度。
3.1.2 准确吸取10mL样品溶液至100mL容量瓶中,加入5%乙酸5mL、水10mL,混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度,混匀后过滤,弃去数mL初滤液后收集约30mL滤液。
3.1.3 将氨基固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后,再将20mL样品滤液过滤,以1mL水清洗萃取柱,用0.25M,PH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要控制流速1滴/秒。
3.2 液相色谱参考条件
3.2.1 色谱柱:Water’s Symmetry C18 3.9×150mm。
3.2.2 柱温:25℃。
3.2.3 紫外检测器:检测波长254nm。
3.2.4 流动相:0.01M磷酸二氢钾:0.1M磷酸氢二钾=480:20 PH=5.0。
3.2.5 流速:0.6mL/min。
3.2.6 进样量:10μL。
3.2.7 色谱分析:量取10μL标准溶液及样品溶液注入色谱仪中,以保留时间定性,以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
4. 结果
4.1 计算

式中:X-样品中核苷酸的含量,mg/g;
h1-样品峰高或峰面积;
C-标准溶液浓度,μg/mL;
K-稀释倍数;
h2-标准溶液峰高或峰面积;
m-试样量,g。
4.2 精密度和准确度
对本方法进行精密度和准确度试验,方法的回收率在83%~99%之间,相对相差≤6%。